2023年9月30日，中南大學(xué)張杜博士為第一作者、李騫教授為通訊作者在《Chemosphere》雜志上發(fā)表題為“Effects of single and combined contamination of total petroleum hydrocarbons and heavy metals on soil microecosystems: Insights into bacterial diversity, assembly, and ecological function”的研究論文，該研究采用16S rRNA測(cè)序技術(shù)，研究了總石油烴（total petroleum hydrocarbons，TPH）單一污染、重金屬單一污染以及總石油烴-重金屬?gòu)?fù)合污染的土壤微生物群落特征，并與相應(yīng)的低污染對(duì)照進(jìn)行比較。
本研究主要目的：（1）研究不同污染脅迫下群落多樣性、組裝機(jī)制、組成、生態(tài)功能和土壤抗性變化。（2）評(píng)價(jià)和比較單一污染和復(fù)合污染的生態(tài)效應(yīng)。研究結(jié)果將為理解TPH-重金屬單污染及復(fù)合污染下土壤微生態(tài)系統(tǒng)的形成機(jī)制提供新的見解，并為污染物的環(huán)境微生態(tài)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供重要啟示。深圳易基因科技為本研究提供微生物組學(xué)技術(shù)服務(wù)。
標(biāo)題：Effects of single and combined contamination of total petroleum hydrocarbons and heavy metals on soil microecosystems: Insights into bacterial diversity, assembly, and ecological function（總石油烴-重金屬的單一和復(fù)合污染對(duì)土壤微生態(tài)系統(tǒng)的影響：細(xì)菌多樣性、組裝和生態(tài)功能研究）
時(shí)間：2023-09-30
期刊：Chemosphere
影響因子：8.8
研究摘要：
探究總石油烴(TPH)和重金屬單一及復(fù)合污染對(duì)土壤微生態(tài)系統(tǒng)的影響對(duì)于生態(tài)環(huán)境（生境）修復(fù)至關(guān)重要，但目前尚不完全清楚。本研究采用高通量測(cè)序方法研究了單一TPH污染、單一金屬污染及其復(fù)合污染對(duì)土壤微生物多樣性、組裝機(jī)制、組成、生態(tài)功能和抗性的影響。研究結(jié)果顯示，污染導(dǎo)致α多樣性減少，與復(fù)合污染相比，單一污染顯示較低的多樣性，這取決于污染物濃度。群落β多樣性主要受周轉(zhuǎn)（turnover）而非嵌入（nestedness）驅(qū)動(dòng)，在污染條件下，群落的生態(tài)位較窄。中性群落模型(neutral community model，NCM)表明，在單一TPH或復(fù)合污染條件下，均質(zhì)分散在群落組裝過(guò)程中起重要作用，而在重金屬污染條件下，均質(zhì)選擇起主導(dǎo)作用。Procrustes分析揭示了群落組成與功能差異之間的相關(guān)性，而Mantel分析則將這種差異與Cr、Cr6+、Pb和TPH的濃度相關(guān)聯(lián)。結(jié)果顯示，TPH和重金屬?gòu)?fù)合污染的土壤表現(xiàn)出與單一金屬污染的土壤具有相似的屬、群落功能和抗性，突顯了重金屬的顯著影響。與碳(C)、氮(N)和硫(S)循環(huán)相關(guān)的生態(tài)功能在TPH污染下增強(qiáng)，但在重金屬脅迫下受損。這些研究結(jié)果增強(qiáng)了對(duì)TPH、重金屬及其復(fù)合污染下土壤微生態(tài)系統(tǒng)的理解，并對(duì)環(huán)境微生態(tài)和污染物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估具有重要意義。
研究圖形摘要
研究結(jié)果
（1）污染土壤的物理化學(xué)性質(zhì)
表1：受污染土壤的物理化學(xué)性質(zhì)
注：重金屬總量、水溶性含量、DTPA可提取量、TPH和pH值以平均值±SD（標(biāo)準(zhǔn)差）表示，n=3。一行中不同字母表明組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異，p＜0.05。污染物總量方面，星號(hào)（*）表示工業(yè)用地土壤環(huán)境質(zhì)量國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB36600-2018）（Cr6+、Cu、Pb、Ni、TPH）和湖南省標(biāo)準(zhǔn)（DB43/T165-2016）（Cr和Zn）中含量超過(guò)開發(fā)用地土壤污染風(fēng)險(xiǎn)篩選值的污染物。對(duì)于水溶性含量，“#”是指含量超過(guò)GB14848-2017中IV類的污染物。“-”表示低于檢測(cè)限值。
圖1：污染土壤的pH值和主要污染物含量差異。
（A） 總Cr含量。
（B） Cr6+含量。
（C） TPH含量。
（D） pH值。
通過(guò)Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。不同字母表明組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著差異，p＜0.05。Ctrl：輕度污染對(duì)照；TPH：TPH污染嚴(yán)重的土壤；HM：重金屬污染嚴(yán)重的土壤；Comb，TPH和重金屬的復(fù)合污染。
（2）群落多樣性
圖2：Ctrl組、TPH組、HM組和Comb組土壤微生物多樣性變化。
A–D. 土壤微生物組α多樣性指數(shù)差異：（A）Shannon多樣性指數(shù)（B）觀察到的特征（C）均質(zhì)性（D）Faith pd。
E–F. 基于未加權(quán)unifac距離（E）和加權(quán)unifrac距離（F）的土壤微生物組β多樣性差異。
G–H. 基于Bray-Curtis距離的細(xì)菌群落β多樣性模式的周轉(zhuǎn)（turnover）差異（G）和嵌入性（nestedness）（H）差異。組間比較采用Mann - Whitney U檢驗(yàn)。不同字母表示組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，p < 0.05。PCoA，主坐標(biāo)分析。PERMANOVA，置換多元方差分析（Permutational multivariate analysis of variance）。
（3）微生物群落組裝過(guò)程
圖3：微生物群落組裝過(guò)程。
A. TPH、HM和Comb中微生物組群落的貝葉斯溯源，以Ctrl為來(lái)源預(yù)測(cè)推定微生物組比例。B
B. 條形圖說(shuō)明了微生物組生境生態(tài)位寬度差異。
C. 條形圖說(shuō)明了Bray-Curtis距離差異。
D. 群落構(gòu)建的中性群落模型（neutral community model，NCM）分析。當(dāng)βNTI絕對(duì)值<2時(shí)，表明均質(zhì)分散在微生物組裝中占主導(dǎo)地位。βNTI＜-2表明均質(zhì)選擇主導(dǎo)微生物組裝過(guò)程。
E. Mantel試驗(yàn)說(shuō)明了群落組成、功能和污染物含量之間的相關(guān)性。通過(guò)Mann-Whitney U檢驗(yàn)評(píng)估組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。不同字母表明組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著差異，p＜0.05。
（4）微生物組成
圖4：Ctrl組、TPH組、HM組和Comb組的微生物群分類組成差異。
A–B. Circos圖顯示TOP10富集的門（phyla）（A）和TOP20富集的屬（genera）（B）。
C. Venn圖顯示群落中共有和特有的屬（group）。
D. 線性判別分析（LDA）效應(yīng)大小（LEfSe）顯示TPH、HM和Comb中顯著的土壤微生物類群富集。顯示LDA評(píng)分>4.0和p<0.05。
（5）主要生態(tài)功能預(yù)測(cè)
圖5：Ctrl組、TPH組、HM組和Comb組的微生物群落功能差異。
A. 基于屬豐度的NMDS (Bray-Curtis)結(jié)果和KEGG 3級(jí)分類豐度的Procrustes分析結(jié)果，表明微生物群組成與微生物群落功能之間的相關(guān)性。
B. 使用picrust預(yù)測(cè)的前50個(gè)KEGG通路對(duì)四個(gè)組進(jìn)行熱圖分析。
C-F. 微生物群落主要生物地球化學(xué)功能（biogeochemical functions）變化。C、N和S循環(huán)功能組（cycle functional groups）（C）的相對(duì)豐度，C循環(huán)功能組（D）的相對(duì)豐度、N循環(huán)功能組（E）的相對(duì)豐度，S循環(huán)功能組（F）的相對(duì)豐度。
（6）抗性相關(guān)功能挖掘
A. 條形圖顯示總Cr抗性基因的豐度差異。
B. 熱圖顯示10個(gè)Cr抗性基因的豐度差異。
C. 條形圖顯示參與外源生物降解和代謝基因的豐度差異。
D. 熱圖顯示22種外源生物降解和代謝通路的豐度差異。
E. 熱圖顯示石油烴降解酶（essential hydrocarbon-degradation enzymes）的豐度差異。組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。不同字母表示組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異，p < 0.05。
研究結(jié)論
本研究中從微生物多樣性、群落組裝機(jī)制、微生物組成、生態(tài)系統(tǒng)功能和土壤抗性等方面全面分析了單一TPH污染、單一重金屬污染及TPH-重金屬?gòu)?fù)合污染對(duì)土壤微生態(tài)系統(tǒng)的影響。分析結(jié)果表明，群落物種周轉(zhuǎn)（turnover）導(dǎo)致群落β多樣性，在污染條件下觀察到的生態(tài)位較窄。重金屬污染對(duì)土壤微生物群落產(chǎn)生均質(zhì)選擇脅迫，而TPH污染對(duì)土壤生物群落產(chǎn)生均質(zhì)分散脅迫。Cr、Cr6+、Pb和TPH濃度對(duì)群落組成和功能相關(guān)變化具有顯著影響。復(fù)合污染土壤表現(xiàn)出與單一金屬污染土壤相似的屬、群落功能和抗性。C、 N和S循環(huán)功能在TPH污染下增強(qiáng)而在金屬污染下受損。本研究有助于加深理解土壤微生態(tài)系統(tǒng)對(duì)TPH、重金屬及其復(fù)合污染的潛在機(jī)制，對(duì)環(huán)境微生物生態(tài)學(xué)和污染物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估具有重要指導(dǎo)意義。
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