易基因送樣要求（版本：2025年01月）

A.DNA類文庫(kù)送樣要求
1. 常規(guī)全基因組重亞硫酸鹽甲基化測(cè)序（WGBS）

提取的DNA樣品：
(1) 提取完整的基因組DNA，無(wú)顯著降解，無(wú)明顯的RNA污染；
(2) Qubit檢測(cè)DNA的總量不低于1 μg，濃度正常不低于10ng/μl，推薦溶解在TE緩沖液中；
(3) 已提取DNA可通過(guò)干冰或冰袋寄送。

組織樣品：
(1) 優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本，其次才是長(zhǎng)期凍存組織，組織長(zhǎng)期凍存優(yōu)先推薦液氮凍存；對(duì)于植物組織盡量選取嫩幼的器官；
(2) 對(duì)于新鮮組織離體分離后，快速切成小塊，去除結(jié)締組織等，PBS漂洗去除殘留血液后，液氮保存；
(3) 動(dòng)物組織推薦送樣量不小于30mg；植物組織推薦送樣量不低于100mg；
(4) 組織樣品推薦通過(guò)干冰寄送。

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，貼壁細(xì)胞胰酶消化，500g離心5min，去培養(yǎng)基后PBS懸浮，500g離心5min，收集約10的6次方細(xì)胞沉淀，干冰寄送。

2. 精準(zhǔn)DNA甲基化和/或羥甲基化測(cè)序（oxWGBS）

提取的DNA樣品：
(1) 提取完整的基因組DNA，無(wú)顯著降解，無(wú)明顯的RNA污染；
(2) Qubit檢測(cè)DNA的總量不低于3 μg，濃度正常不低于30ng/μl，推薦溶解在TE緩沖液中；
(3) 已提取DNA可通過(guò)干冰或冰袋寄送。

組織樣品：
(1) 優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本，其次才是長(zhǎng)期凍存組織，組織長(zhǎng)期凍存優(yōu)先推薦液氮凍存；對(duì)于植物組織盡量選取嫩幼的器官；
(2) 對(duì)于新鮮組織離體分離后，快速切成小塊，去除結(jié)締組織等，PBS漂洗去除殘留血液后，液氮保存；
(3) 動(dòng)物組織推薦送樣量不小于60mg；植物組織推薦送樣量不低于150mg；
(4) 組織樣品推薦通過(guò)干冰寄送。

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，貼壁細(xì)胞胰酶消化，500g離心5min，去培養(yǎng)基后PBS懸浮，500g離心5min，收集約10的6次方細(xì)胞沉淀，干冰寄送。

3. 簡(jiǎn)化重亞硫酸鹽測(cè)序（RRBS/dRRBS）

提取的DNA樣品：
(1) 提取完整的基因組DNA，無(wú)明顯降解和RNA污染；
(2) Qubit檢測(cè)DNA的總量不低于1 μg，濃度正常不低于20ng/μl;
(3) DNA溶解于EB緩沖液中（10mM Tris-HCl，pH 7.5-8.5）,不推薦溶解在TE緩沖液中；
(4) 已提取DNA可通過(guò)干冰或冰袋寄送。

組織樣品：
(1) 優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本，其次才是長(zhǎng)期凍存組織，組織長(zhǎng)期凍存優(yōu)先推薦液氮凍存；對(duì)于植物組織盡量選取嫩幼的器官；
(2) 對(duì)于新鮮組織離體分離后，快速切成小塊，去除結(jié)締組織等，PBS漂洗去除殘留血液后，液氮保存；
(3) 動(dòng)物組織推薦送樣量不小于60mg；植物組織推薦送樣量不低于150mg；
(4) 組織樣品推薦通過(guò)干冰寄送。

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，貼壁細(xì)胞胰酶消化，500g離心5min，去培養(yǎng)基后PBS懸浮，500g離心5min，收集約10的6次方細(xì)胞沉淀，干冰寄送。

4. 簡(jiǎn)化氧化和重亞硫酸鹽測(cè)序（oxRRBS & RRBS）

提取的DNA樣品：
(1) 提取完整的基因組DNA，無(wú)明顯降解和RNA污染；
(2) Qubit檢測(cè)DNA的總量不低于3 μg，濃度正常不低于20ng/μl;
(3) DNA溶解于EB緩沖液中（10mM Tris-HCl，pH 7.5-8.5）,不推薦溶解在TE緩沖液中；
(4) 已提取DNA可通過(guò)干冰或冰袋寄送。

組織樣品：
(1) 優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本，其次才是長(zhǎng)期凍存組織，組織長(zhǎng)期凍存優(yōu)先推薦液氮凍存；對(duì)于植物組織盡量選取嫩幼的器官；
(2) 對(duì)于新鮮組織離體分離后，快速切成小塊，去除結(jié)締組織等，PBS漂洗去除殘留血液后，液氮保存；
(3) 動(dòng)物組織推薦送樣量不小于60mg；植物組織推薦送樣量不低于150mg；
(4) 組織樣品推薦通過(guò)干冰寄送。

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，貼壁細(xì)胞胰酶消化，500g離心5min，去培養(yǎng)基后PBS懸浮，500g離心5min，收集約10的6次方細(xì)胞沉淀，干冰寄送。

5. 液相雜交捕獲重亞硫酸鹽甲基化測(cè)序（LHC-BS）

提取的DNA樣品：
(1) 提取完整的基因組DNA，無(wú)明顯降解和RNA污染；
(2) Qubit檢測(cè)DNA的總量不低于3μg，濃度正常不低于20ng/μl，DNA推薦溶解于TE緩沖液中；
(3) 已提取DNA可通過(guò)干冰或冰袋寄送。

組織樣品：
(1) 優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本，其次才是長(zhǎng)期凍存組織，組織長(zhǎng)期凍存優(yōu)先推薦液氮凍存；對(duì)于植物組織盡量選取嫩幼的器官；
(2) 對(duì)于新鮮組織離體分離后，快速切成小塊，去除結(jié)締組織等，PBS漂洗去除殘留血液后，液氮保存；
(3) 動(dòng)物組織推薦送樣量不小于60mg；植物組織推薦送樣量不低于150mg；
(4) 組織樣品推薦通過(guò)干冰寄送。

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，貼壁細(xì)胞胰酶消化，500g離心5min，去培養(yǎng)基后PBS懸浮，500g離心5min，收集約10的6次方細(xì)胞沉淀，干冰寄送；

6. 甲基化DNA免疫共沉淀測(cè)序(MeDIP)

提取的DNA樣品：
(1) 提取完整的基因組DNA，無(wú)明顯降解和RNA污染；
(2) Qubit檢測(cè)DNA的總量不低于2 μg，濃度正常不低于20ng/μl，DNA推薦溶解于TE緩沖液中；
(3) 已提取DNA可通過(guò)干冰或冰袋寄送。

組織樣品：
(1) 優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本，其次才是長(zhǎng)期凍存組織，組織長(zhǎng)期凍存優(yōu)先推薦液氮凍存；對(duì)于植物組織盡量選取嫩幼的器官；
(2) 對(duì)于新鮮組織離體分離后，快速切成小塊，去除結(jié)締組織等，PBS漂洗去除殘留血液后，液氮保存；
(3) 動(dòng)物組織推薦送樣量不小于60mg；植物組織推薦送樣量不低于150mg；
(4) 組織樣品推薦通過(guò)干冰寄送。

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，貼壁細(xì)胞胰酶消化，500g離心5min，去培養(yǎng)基后PBS懸浮，500g離心5min，收集約10的6次方細(xì)胞沉淀，干冰寄送。


7. 羥甲基化DNA免疫共沉淀測(cè)序(hMeDIP)

提取的DNA樣品：
(1) 提取完整的基因組DNA，無(wú)明顯降解和RNA污染；
(2) Qubit檢測(cè)DNA的總量不低于3μg，濃度正常不低于20ng/μl，DNA推薦溶解于TE緩沖液中；
(3) 已提取DNA可通過(guò)干冰或冰袋寄送。

組織樣品：
(1) 優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本，其次才是長(zhǎng)期凍存組織，組織長(zhǎng)期凍存優(yōu)先推薦液氮凍存；對(duì)于植物組織盡量選取嫩幼的器官；
(2) 對(duì)于新鮮組織離體分離后，快速切成小塊，去除結(jié)締組織等，PBS漂洗去除殘留血液后，液氮保存；
(3) 動(dòng)物組織推薦送樣量不小于60mg；植物組織推薦送樣量不低于150mg；
(4) 組織樣品推薦通過(guò)干冰寄送。

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，貼壁細(xì)胞胰酶消化，500g離心5min，去培養(yǎng)基后PBS懸浮，500g離心5min，收集約10的6次方細(xì)胞沉淀，干冰寄送。


8. 擴(kuò)增子甲基化（Amplicon-BS）

提取的DNA樣品：
(1) 提取完整的基因組DNA，無(wú)明顯降解和RNA污染；
(2) Qubit檢測(cè)DNA的總量不低于100ng/amplicon，濃度正常不低于10ng/μl，DNA推薦溶解于TE緩沖液中；
(3) 已提取DNA可通過(guò)干冰或冰袋寄送。

組織樣品：
(1) 優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本，其次才是長(zhǎng)期凍存組織，組織長(zhǎng)期凍存優(yōu)先推薦液氮凍存；對(duì)于植物組織盡量選取嫩幼的器官；
(2) 對(duì)于新鮮組織離體分離后，快速切成小塊，去除結(jié)締組織等，PBS漂洗去除殘留血液后，液氮保存；
(3) 動(dòng)物組織推薦送樣量不小于60mg；植物組織推薦送樣量不低于150mg，實(shí)際用量根據(jù)PCR產(chǎn)物多少確定；
(4) 組織樣品推薦通過(guò)干冰寄送。

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，貼壁細(xì)胞胰酶消化，500g離心5min，去培養(yǎng)基后PBS懸浮，500g離心5min，收集約10的6次方細(xì)胞沉淀，干冰寄送。

9. 單細(xì)胞/微量細(xì)胞全基因組甲基化

(1) 分離細(xì)胞經(jīng)PBS洗滌，去除培養(yǎng)過(guò)程或體液雜質(zhì)，該雜質(zhì)可直接抑制后續(xù)酶反應(yīng)；
(2) 用流式細(xì)胞儀或顯微操作分離單細(xì)胞與0.2ml的PCR管中底部；
(3) 細(xì)胞分離后的體積推薦1-5ul，最多不超過(guò)10ul，加等體積的公司寄送的DNA裂解液和1ul的蛋白酶K，37℃反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)后-80℃保存；
(4) 記錄每管細(xì)胞體積和加入的buffer體積和蛋白酶K體積；
(5) 記錄每管細(xì)胞的數(shù)量，微量細(xì)胞推薦每個(gè)樣品細(xì)胞量相同，在100-300個(gè)細(xì)胞之間；若細(xì)胞數(shù)量大于1000，細(xì)胞分離體積不超過(guò)20ul；
(6) 用 Parafilm 封口膜纏繞封口，裝入 PCR管盒，橡皮筋固定，再裝入自封袋，大體積干冰運(yùn)輸。

10. 特殊樣本甲基化測(cè)序（FFPE/cfDNA等）

(1) FFPE/游離DNA等嚴(yán)重降解的全基因組甲基化檢測(cè)推薦提供DNA總量不低于10ng，濃度正常不低于1ng/ul，DNA溶解于EB緩沖液（10mM Tris-HCl，pH 7.5-8.5） 。
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B.RNA類文庫(kù)送樣要求
1. 普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（RNA-seq）

提取的RNA樣品：
(1) 提取的總RNA Qubit檢測(cè)總量不低于2μg，濃度正?！?0ng/ul；
(2) 電泳檢測(cè)具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過(guò)干冰寄送。

組織樣品：
(1) 優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本，其次才是長(zhǎng)期凍存組織，組織長(zhǎng)期凍存優(yōu)先推薦液氮凍存；對(duì)于植物組織盡量選取嫩幼的器官；
(2) 對(duì)于新鮮組織離體分離后，PBS漂洗去除殘留血液，快速切成小塊，去除結(jié)締組織等，推薦用RNA later液氮保存；或組織處理后液氮研磨，在1.5ml離心管中加入1ml的Trizol劇烈混勻，-80℃保存；
(3) 動(dòng)物組織推薦送樣量不小于60mg；植物組織推薦送樣量不低于150mg；
(4) 組織樣品推薦通過(guò)干冰寄送。

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，貼壁細(xì)胞胰酶消化，500g離心5min，去培養(yǎng)基后PBS懸浮，500g離心5min，收集10的6-7次方細(xì)胞沉淀，在細(xì)胞沉淀中加入1ml的Trizol裂解液，將細(xì)胞吹散，干冰寄送。

2. 真核鏈特異性轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（ssRNA-seq）

提取的RNA樣品：
(1) 提取的總RNA Qubit檢測(cè)總量不低于2μg，濃度正?！?00ng/ul；
(2) 電泳檢測(cè)具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過(guò)干冰寄送。

組織樣品：
(1) 優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本，其次才是長(zhǎng)期凍存組織，組織長(zhǎng)期凍存優(yōu)先推薦液氮凍存；對(duì)于植物組織盡量選取嫩幼的器官；
(2) 對(duì)于新鮮組織離體分離后，PBS漂洗去除殘留血液，快速切成小塊，去除結(jié)締組織等，推薦用RNA later液氮保存；或組織處理后液氮研磨，在1.5ml離心管中加入1ml的Trizol劇烈混勻，-80℃保存；
(3) 動(dòng)物組織推薦送樣量不小于60mg；植物組織推薦送樣量不低于150mg；
(4) 組織樣品推薦通過(guò)干冰寄送。

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，貼壁細(xì)胞胰酶消化，500g離心5min，去培養(yǎng)基后PBS懸浮，500g離心5min，收集10的6-7次方細(xì)胞沉淀，在細(xì)胞沉淀中加入1ml的Trizol裂解液，將細(xì)胞吹散，干冰寄送。

3. Small RNA測(cè)序

提取的RNA樣品：
(1) 提取的總RNA Qubit檢測(cè)總量不低于2μg，濃度正?！?00ng/ul；
(2) 電泳檢測(cè)具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過(guò)干冰寄送。

組織樣品：
(1) 優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本，其次才是長(zhǎng)期凍存組織，組織長(zhǎng)期凍存優(yōu)先推薦液氮凍存；對(duì)于植物組織盡量選取嫩幼的器官；
(2) 對(duì)于新鮮組織離體分離后，PBS漂洗去除殘留血液，快速切成小塊，去除結(jié)締組織等，推薦用RNA later液氮保存；或組織處理后液氮研磨，在1.5ml離心管中加入1ml的Trizol劇烈混勻，-80℃保存；
(3) 動(dòng)物組織推薦送樣量不小于60mg；植物組織推薦送樣量不低于150mg；
(4) 組織樣品推薦通過(guò)干冰寄送。

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，貼壁細(xì)胞胰酶消化，500g離心5min，去培養(yǎng)基后PBS懸浮，500g離心5min，收集10的6-7次方細(xì)胞沉淀，在細(xì)胞沉淀中加入1ml的Trizol裂解液，將細(xì)胞吹散，干冰寄送。

4. ceRNA測(cè)序

提取的RNA樣品：
(1) 提取的總RNA Qubit檢測(cè)總量不低于2μg，濃度正常≥100ng/ul；
(2) 電泳檢測(cè)具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過(guò)干冰寄送。

組織樣品：
(1) 優(yōu)先選擇新鮮采集的樣本，其次才是長(zhǎng)期凍存組織，組織長(zhǎng)期凍存優(yōu)先推薦液氮凍存；對(duì)于植物組織盡量選取嫩幼的器官；
(2) 對(duì)于新鮮組織離體分離后，PBS漂洗去除殘留血液，快速切成小塊，去除結(jié)締組織等，推薦用RNA later液氮保存；或組織處理后液氮研磨，在1.5ml離心管中加入1ml的Trizol劇烈混勻，-80℃保存；
(3) 動(dòng)物組織推薦送樣量不小于60mg；植物組織推薦送樣量不低于150mg；
(4) 組織樣品推薦通過(guò)干冰寄送。
培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，貼壁細(xì)胞胰酶消化，500g離心5min，去培養(yǎng)基后PBS懸浮，500g離心5min，收集10的6-7次方細(xì)胞沉淀，在細(xì)胞沉淀中加入1ml的Trizol裂解液，將細(xì)胞吹散，干冰寄送。

5. 常規(guī)m6A RNA甲基化測(cè)序（MeRIP）

提取的RNA樣品：
(1) 提取的總RNA Qubit檢測(cè)總量不低于75μg，濃度正?！?50ng/ul；
(2) 電泳檢測(cè)具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過(guò)干冰寄送。

動(dòng)物組織樣品：
(1) 優(yōu)先選用新鮮采集的樣本，液氮或-80℃凍存的組織，凍存期間避免反復(fù)凍融；組織量推薦不小于50mg；
(2) 組織離體后，用PBS或生理鹽水快速漂洗，去除殘留血液，血管或結(jié)締組織后，馬上進(jìn)行液氮萃凍，后轉(zhuǎn)入凍存管液氮或-80℃保存；或?qū)⒔M織切成小片后，在含有RNA later的凍存管中液氮或-80℃保存；

植物組織樣品：
(1) 植物組織樣本建議送樣量≥500mg。盡量選取新鮮、幼嫩、生長(zhǎng) 旺盛的組織部位；
(2) 準(zhǔn)確取得所需組織后，用清水清洗干凈表面的灰塵及泥土，立即放入事先標(biāo)記好的凍存管中，或者用錫箔紙包裹好做好標(biāo)記；
(3) 立即投入液氮中萃凍，后進(jìn)行液氮或-80℃冰箱保存；

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 貼壁細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型，去除細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS漂洗細(xì)胞2-3次，最后一次將PBS去除干凈，（一定要去除干凈，殘留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器輕輕吹打，用Trizol將細(xì)胞裂解下來(lái)，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個(gè)樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的7次方左右；
(2) 懸浮細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型后，收集細(xì)胞，用PBS洗滌1-2次，最后一次離心后，去除干凈PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速將細(xì)胞重懸，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個(gè)樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的7次方左右；
(3) 干冰寄送。

6. 常規(guī) m5C/m1A/m7G/ac4C RNA 修飾測(cè)序（RIP）

提取的RNA樣品：
(1) 提取的總 RNA Qubit 檢測(cè)總量不低于 100μg，濃度正?！?ug/ul；
(2) 電泳檢測(cè)具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過(guò)干冰寄送。

動(dòng)物組織樣品：
(1) 優(yōu)先選用新鮮采集的樣本，液氮或-80℃凍存的組織，凍存期間避免反復(fù)凍融；組織量推薦不小于100mg；
(2) 組織離體后，用PBS 或生理鹽水快速漂洗，去除殘留血液，血管或結(jié)締組織后，馬上進(jìn)行液氮萃凍，后轉(zhuǎn)入凍存管液氮或-80℃保存；或?qū)⒔M織切成小片后，在含有RNA later的凍存管中液氮或-80℃保存；

植物組織樣品：
(1) 植物組織樣本建議送樣量≥600mg。盡量選取新鮮、幼嫩、生長(zhǎng) 旺盛的組織部位；
(2) 準(zhǔn)確取得所需組織后，用清水清洗干凈表面的灰塵及泥土，立即放入事先標(biāo)記好的凍存管中，或者用錫箔紙包裹好做好標(biāo)記；
(3) 立即投入液氮中萃凍，后進(jìn)行液氮或-80℃冰箱保存；

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 貼壁細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型，去除細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS漂洗細(xì)胞2-3次，最后一次將PBS去除干凈，（一定要去除干凈，殘留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器輕輕吹打，用Trizol將細(xì)胞裂解下來(lái)，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個(gè)樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的7次方左右；
(2) 懸浮細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型后，收集細(xì)胞，用PBS洗滌1-2次，最后一次離心后，去除干凈PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速將細(xì)胞重懸，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個(gè)樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的7次方左右；
(3) 干冰寄送。

7. 常規(guī) m5C RNA 甲基化測(cè)序（RNA-Bis）

提取的RNA樣品：
(1) 提取的總 RNA Qubit 檢測(cè)總量不低于 50μg，濃度正?！?00ng/ul；
(2) 電泳檢測(cè)具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過(guò)干冰寄送。

動(dòng)物組織樣品：
(1) 優(yōu)先選用新鮮采集的樣本，液氮或-80℃凍存的組織，凍存期間避免反復(fù)凍融；組織量推薦不小于30mg；
(2) 組織離體后，用PBS 或生理鹽水快速漂洗，去除殘留血液，血管或結(jié)締組織后，馬上進(jìn)行液氮萃凍，后轉(zhuǎn)入凍存管液氮或-80℃保存；或?qū)⒔M織切成小片后，在含有RNA later的凍存管中液氮或-80℃保存；

植物組織樣品：
(1) 植物組織樣本建議送樣量≥300mg。盡量選取新鮮、幼嫩、生長(zhǎng) 旺盛的組織部位；
(2) 準(zhǔn)確取得所需組織后，用清水清洗干凈表面的灰塵及泥土，立即放入事先標(biāo)記好的凍存管中，或者用錫箔紙包裹好做好標(biāo)記；
(3) 立即投入液氮中萃凍，后進(jìn)行液氮或-80℃冰箱保存；

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 貼壁細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型，去除細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS漂洗細(xì)胞2-3次，最后一次將PBS去除干凈，（一定要去除干凈，殘留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器輕輕吹打，用Trizol將細(xì)胞裂解下來(lái)，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個(gè)樣本細(xì)胞數(shù)量建議5X10的6次方左右；
(2) 懸浮細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型后，收集細(xì)胞，用PBS洗滌1-2次，最后一次離心后，去除干凈PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速將細(xì)胞重懸，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個(gè)樣本細(xì)胞數(shù)量建議5X10的6次方左右；
(3) 干冰寄送。

8. 微量（m6A） RNA甲基化測(cè)序（MeRIP）

提取的RNA樣品：
(1) 提取的總 RNA Qubit 檢測(cè)總量不低于 10μg，濃度正?！?00ng/ul；
(2) 電泳檢測(cè)具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過(guò)干冰寄送。

動(dòng)物組織樣品：
(1) 優(yōu)先選用新鮮采集的樣本，液氮或-80℃凍存的組織，凍存期間避免反復(fù)凍融；組織量推薦不小于30mg；
(2) 組織離體后，用PBS 或生理鹽水快速漂洗，去除殘留血液，血管或結(jié)締組織后，馬上進(jìn)行液氮萃凍，后轉(zhuǎn)入凍存管液氮或-80℃保存；或?qū)⒔M織切成小片后，在含有RNA later的凍存管中液氮或-80℃保存；

植物組織樣品：
(1) 植物組織樣本建議送樣量≥100mg。盡量選取新鮮、幼嫩、生長(zhǎng) 旺盛的組織部位；
(2) 準(zhǔn)確取得所需組織后，用清水清洗干凈表面的灰塵及泥土，立即放入事先標(biāo)記好的凍存管中，或者用錫箔紙包裹好做好標(biāo)記；
(3) 立即投入液氮中萃凍，后進(jìn)行液氮或-80℃冰箱保存；

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 貼壁細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型，去除細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS漂洗細(xì)胞2-3次，最后一次將PBS去除干凈，（一定要去除干凈，殘留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器輕輕吹打，用Trizol將細(xì)胞裂解下來(lái)，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個(gè)樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的6次方左右；
(2) 懸浮細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型后，收集細(xì)胞，用PBS洗滌1-2次，最后一次離心后，去除干凈PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速將細(xì)胞重懸，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個(gè)樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的6次方左右；
(3) 干冰寄送。

9. 微量（m7G/ac4C/m1A）RNA 甲基化測(cè)序（RIP）

提取的RNA樣品：
(1) 提取的總 RNA Qubit 檢測(cè)總量不低于 30μg，濃度正?！?00ng/ul；
(2) 電泳檢測(cè)具有明顯的18S或28S主帶，且條帶清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通過(guò)干冰寄送。

動(dòng)物組織樣品：
(1) 優(yōu)先選用新鮮采集的樣本，液氮或-80℃凍存的組織，凍存期間避免反復(fù)凍融；組織量推薦不小于40mg；
(2) 組織離體后，用PBS 或生理鹽水快速漂洗，去除殘留血液，血管或結(jié)締組織后，馬上進(jìn)行液氮萃凍，后轉(zhuǎn)入凍存管液氮或-80℃保存；或?qū)⒔M織切成小片后，在含有RNA later的凍存管中液氮或-80℃保存；

植物組織樣品：
(1) 植物組織樣本建議送樣量≥400mg。盡量選取新鮮、幼嫩、生長(zhǎng) 旺盛的組織部位；
(2) 準(zhǔn)確取得所需組織后，用清水清洗干凈表面的灰塵及泥土，立即放入事先標(biāo)記好的凍存管中，或者用錫箔紙包裹好做好標(biāo)記；
(3) 立即投入液氮中萃凍，后進(jìn)行液氮或-80℃冰箱保存；

培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
(1) 貼壁細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型，去除細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS漂洗細(xì)胞2-3次，最后一次將PBS去除干凈，（一定要去除干凈，殘留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器輕輕吹打，用Trizol將細(xì)胞裂解下來(lái)，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個(gè)樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的6次方左右；
(2) 懸浮細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期或達(dá)到細(xì)胞表型后，收集細(xì)胞，用PBS洗滌1-2次，最后一次離心后，去除干凈PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速將細(xì)胞重懸，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管后，-80℃保存；每個(gè)樣本細(xì)胞數(shù)量建議10的6次方左右；
(3) 干冰寄送。

10. 單細(xì)胞/微量細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（scRNA-seq）

(1) 細(xì)胞經(jīng)PBS漂洗后進(jìn)行分離，分離步驟如下：
(2) 細(xì)胞分離前，在0.2ml的無(wú)菌PCR管中加入2ul的RNA裂解液（實(shí)驗(yàn)開始前，聯(lián)系公司寄送）；
(3) 將細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀或顯微操作轉(zhuǎn)移至含裂解液的PCR管中；分離細(xì)胞體積不超過(guò)0.5ul，以0.2-0.5ul為宜；-80℃凍存；
(4) 記錄每管細(xì)胞量，每管樣品推薦相同細(xì)胞量；
(5) 微量細(xì)胞推薦在40-100個(gè)細(xì)胞之間；
(6) 細(xì)胞分離液不能含有培養(yǎng)基，體液等，其對(duì)后續(xù)有抑制作用。

C.染色質(zhì)類文庫(kù)送樣要求
1. ATAC-seq（細(xì)胞）

(1) 取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行胰蛋白酶消化計(jì)數(shù)，保證細(xì)胞存活率在90%以上；
(2) 將細(xì)胞重懸在凍存液中，每個(gè)凍存管加入8-10萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，標(biāo)記每管細(xì)胞數(shù)量，每個(gè)樣品平行準(zhǔn)備2-3管；
(3) 加入0.5-1ml凍存液，梯度降溫至-80℃保存。
(4) 運(yùn)輸保證足夠干冰，將細(xì)胞放入中間
(5) 凍存液基本配方： 20% 胎牛血清（FBS）+70% 完全培養(yǎng)基+10% 二甲亞砜（DMSO） 。

2. 染色體免疫共沉淀測(cè)序（CHIP-seq）

需要抗體富集：
貼壁細(xì)胞：
(1) 用PBS緩沖液（pH7.4）新鮮配制濃度為1%的甲醛溶液，37℃水浴鍋預(yù)熱待用；
(2) 棄除細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS洗滌后（去除干凈），加入預(yù)熱的1%新鮮配制的甲醛溶液，對(duì)于轉(zhuǎn)錄因子或DNA結(jié)合蛋白，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育10-15min固定；對(duì)于組蛋白修飾研究，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育5-8min。轉(zhuǎn)錄因子等研究要求直接在培養(yǎng)皿固定，組蛋白修飾優(yōu)先推薦在培養(yǎng)皿直接固定，可接受胰蛋白酶消化細(xì)胞懸液后固定，（10cm細(xì)胞培養(yǎng)板需要10ml，15cm細(xì)胞培養(yǎng)板需要15ml）；
(3) 棄除甲醛溶液，分別用預(yù)冷的1×PBS+BSA（5mg/ml）緩沖液及預(yù)冷的1×PBS緩沖液清洗細(xì)胞各一次（10cm細(xì)胞培養(yǎng)板需要10ml，15cm細(xì)胞培養(yǎng)板需要15ml）；
(4) 在細(xì)胞培養(yǎng)板上均勻滴上500ul冰預(yù)冷的PBS完全液（PBS+1×PIC蛋白酶抑制劑）；
(5) 用刮板將細(xì)胞從培養(yǎng)板上刮下來(lái)，收集至EP管中；
(6) 2000rpm離心1分鐘；
(7) 移除上清，輕彈管壁使收集的細(xì)胞重懸于殘余的PBS中；
(8) -80℃凍存，干冰寄送，每個(gè)樣本細(xì)胞量不低于107。

懸浮細(xì)胞樣本處理：
(1) 用PBS緩沖液（pH7.4）新鮮配制濃度為1%的甲醛溶液，37℃預(yù)熱待用，每個(gè)樣品約10ml；
(2) 將不少于2X107細(xì)胞收集到離心管，500g離心5min棄除細(xì)胞培養(yǎng)液；用PBS洗滌，離心后（去除干凈），加入5-10ml預(yù)熱的1%新鮮配制的甲醛溶液輕輕重懸細(xì)胞，對(duì)于轉(zhuǎn)錄因子或DNA結(jié)合蛋白，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育10-15min固定；對(duì)于組蛋白修飾研究，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育5-10min；
(3) 棄除甲醛溶液后（可用終濃度125mM的甘氨酸中和），分別用約10ml預(yù)冷的1×PBS+BSA（5mg/ml）緩沖液及預(yù)冷的1×PBS緩沖液清洗細(xì)胞各一次；
(4) 在細(xì)胞沉淀中加入約500ul冰預(yù)冷的PBS完全液（PBS+1×PIC，蛋白酶抑制劑），轉(zhuǎn)入1.5ml的離心管，2000rpm離心1分鐘；
(5) 移除上清，輕彈管壁使收集的細(xì)胞重懸于殘余的PBS中；
(6) -80℃凍存，干冰寄送，每個(gè)樣本細(xì)胞量不低于107。

動(dòng)物組織樣品處理要求
(1) 盡快取下組織，去除其他附著組織如脂肪組織等；
(2) 剪開主血管，用冰冷的PBS 緩沖液（pH7.4）洗去血液；
(3) 盡量去除組織表面液體后放置到凍存管，液氮速凍后-80℃保存；
(4) 【注意事項(xiàng)】整個(gè)處理過(guò)程中要注意外源物種組織或者細(xì)胞污染，處理時(shí)間不要太長(zhǎng)，最好不要超過(guò)1 小時(shí)，且在冰上操作。
(5) 樣品需求量：每次ChIP 反應(yīng)起始量為：人或者小鼠的組織：0.2 g 以上；（以上起始量根據(jù)小鼠組織實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其他物種根據(jù)基因組大小起始量按比例調(diào)整）
(6) 樣品必須使用干冰運(yùn)輸，時(shí)間盡量不要超過(guò) 72 小時(shí)，同時(shí)請(qǐng)用 Parafilm 膜將管口密封好，以防出現(xiàn)污染。
(7) 【注意事項(xiàng)】在運(yùn)輸過(guò)程中一定不能出現(xiàn)凍融現(xiàn)象出現(xiàn)，如果發(fā)現(xiàn)凍融現(xiàn)象建議重新寄樣品。
(8) 請(qǐng)客戶仔細(xì)處理樣品，盡量避免污染和運(yùn)輸途中出現(xiàn)凍融，如果樣品珍貴請(qǐng)客戶自行將所送樣品進(jìn)行保留備份。

富集后僅建庫(kù)：
(1) IP后Qubit檢測(cè)富集DNA≥5ng，濃度正常不低于0.5ng/ul；
(2) DNA溶解于EB緩沖液（10mM Tris-HCl，pH 
(3) 7.5-8.5）； 
(4) 提供IP前染色質(zhì)打斷后的電泳圖片，DNA片段分布在100-500bp為宜。