微量或單細(xì)胞樣本取樣要求
微量或單細(xì)胞樣本取樣要求（版本：2023年8月）
A、微量或單細(xì)胞樣本取樣要求
1、微量細(xì)胞或單細(xì)胞全基因組甲基化測序（Micro-WGBS/scWGBS）
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量大于10000，收集細(xì)胞后，可通過離心(1000g，4℃離心5min)，去除培養(yǎng)基或PBS液體，將細(xì)胞沉淀干冰寄送。也可以將細(xì)胞保存在細(xì)胞凍存液，梯度降溫后，干冰寄送。
以下情況需提前聯(lián)系，公司寄送WGBS甲基化細(xì)胞裂解液：
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量在1000-10000，分選細(xì)胞到1.5ml離心管后，要求體積不超過20ul（體積過大可通過1000g，4℃，5-10min離心，小心去除部分液體）。大約預(yù)估液體體積，加入等體積的細(xì)胞裂解液和0.5ul的蛋白酶K，記錄每個樣品加入裂解液的體積和大約細(xì)胞數(shù)目。離心管直立-80凍存，將細(xì)胞和裂解液一起固定在管子底部，固定過后干冰寄送；
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量在100-1000，分選細(xì)胞到1.5ml離心管后，要求體積不超過8ul（體積過大可通過1000g，4℃，5-10min離心，小心去除部分液體）。大約預(yù)估液體體積，加入等體積的細(xì)胞裂解液和0.5ul的蛋白酶K，記錄每個樣品加入裂解液的體積和大約細(xì)胞數(shù)目。離心管直立-80凍存，將細(xì)胞和裂解液一起固定在管子底部，固定過后干冰寄送。
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量在1-100，分選細(xì)胞到PCR管后，要求體積不超過5ul（體積過大可通過1000g，4℃，5-10min離心，小心去除部分液體）。大約預(yù)估液體體積，加入等體積的細(xì)胞裂解液和0.5ul的蛋白酶K，記錄每個樣品加入裂解液的體積和大約細(xì)胞數(shù)目。PCR管直立-80凍存，將細(xì)胞和裂解液一起固定在管子底部，固定過后干冰寄送；
2、微量細(xì)胞或單細(xì)胞簡化基因組甲基化測序（XRBS/scXRBS）
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量大于10000，收集細(xì)胞后，可通過離心(1000g，4℃離心5min)，去除培養(yǎng)基或PBS液體，將細(xì)胞沉淀干冰寄送。也可以將細(xì)胞保存在細(xì)胞凍存液，梯度降溫后，干冰寄送。
以下情況需提前聯(lián)系，公司寄送XRBS甲基化細(xì)胞裂解液：
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量在1000-10000，分選細(xì)胞到1.5ml離心管后，要求體積不超過20ul（體積過大可通過1000g，4℃，5-10min離心，小心去除部分液體）。大約預(yù)估液體體積，加入等體積的細(xì)胞裂解液和0.5ul的蛋白酶，記錄每個樣品加入裂解液的體積和大約細(xì)胞數(shù)目。離心管直立-80凍存，將細(xì)胞和裂解液一起固定在管子底部，固定過后干冰寄送；
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量在100-1000，細(xì)胞潔凈度要求較高，分選的細(xì)胞中不能含培養(yǎng)基，體液等抑制酶反應(yīng)的液體等，分選后體積不超過4ul（體積過大可通過1000g，4℃，5-10min離心，小心去除部分液體），細(xì)胞分選到PCR管中，加入4ul的細(xì)胞裂解液和0.5ul的蛋白酶，記錄每個樣品大約細(xì)胞數(shù)目。離心管直立-80凍存，將細(xì)胞和裂解液一起固定在管子底部，固定過后干冰寄送；
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量在1-100，細(xì)胞潔凈度要求較高，分選的細(xì)胞中不能含培養(yǎng)基，體液等抑制酶反應(yīng)的液體等，分選后體積不超過1ul（體積過大可通過1000g，4℃，5-10min離心，小心去除部分液體），細(xì)胞分選到PCR管中，加入3ul的細(xì)胞裂解液和0.5ul的蛋白酶，記錄每個樣品大約細(xì)胞數(shù)目。離心管直立-80凍存，將細(xì)胞和裂解液一起固定在管子底部，固定過后干冰寄送；
3、微量細(xì)胞或單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序（Smart-seq2）
注意事項：
1） RNA容易降解且成熟mRNA主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，在細(xì)胞分離前，確保環(huán)境的潔凈，以及分離過程中保證細(xì)胞的完整性，以免細(xì)胞破裂等。
2） 建議超凈臺內(nèi)操作，實驗前用 RNA-zap(Ambion)擦拭實驗臺面及相關(guān)器材，防止RNA 酶污染。
3） RNA 酶在外界環(huán)境，人體皮膚表面、汗液等廣泛存在，試驗操作請佩戴一次性手套及口罩， 并用酒精，RNA-zap擦拭手套和操作空間，實驗過程中不要隨意接觸試驗無關(guān)的易污染物品。
4） 細(xì)胞培養(yǎng)基、體液（如血液）等雜質(zhì)殘留會嚴(yán)重影響后續(xù)酶反應(yīng)，細(xì)胞分離前請先用 PBS 洗滌，去除培養(yǎng)基等雜質(zhì)后再進行后續(xù)操作。
5） 建議同一項目，不同樣本，保持細(xì)胞的數(shù)量大致相同。
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量大于200，細(xì)胞收集到1.5ml離心管，記錄每個樣品管中的細(xì)胞數(shù)目，分離細(xì)胞如果液體超過20ul，可通過離心(1000g，4℃離心5-10min)，小心去除培養(yǎng)基或PBS液體，在細(xì)胞沉淀中加入500ul的Trizol裂解液，混勻-80保存，干冰寄送。
以下情況需提前聯(lián)系，公司寄送RNA細(xì)胞裂解液：
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量在50-200，細(xì)胞收集到PCR管中，細(xì)胞分離殘留液體體積不超過1ul，記錄每個樣品管中的細(xì)胞數(shù)目，在細(xì)胞中加入10ul的RNA細(xì)胞裂解液（如果確定細(xì)胞隨帶的液體體積小于1ul，可先在PCR管中先加入裂解液，然后將分選的細(xì)胞直接加入裂解液中），PCR管直立-80凍存，將細(xì)胞和裂解液一起固定在管子底部，固定過后干冰寄送。
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量在10-50，細(xì)胞收集到PCR管中，細(xì)胞分離殘留液體體積不超過0.5ul，記錄每個樣品管中的細(xì)胞數(shù)目，在細(xì)胞中加入8ul的RNA細(xì)胞裂解液（如果確定細(xì)胞隨帶的液體體積小于0.5ul，可先在PCR管中加入裂解液，然后將分選的細(xì)胞直接加入裂解液中），PCR管直立-80凍存，將細(xì)胞和裂解液一起固定在管子底部，固定過后干冰寄送。
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量在1-10，細(xì)胞收集到PCR管中，細(xì)胞分離殘留液體體積不超過0.5ul，記錄每個樣品管中的細(xì)胞數(shù)目，在細(xì)胞中加入5ul的RNA細(xì)胞裂解液（如果確定細(xì)胞隨帶的液體體積小于0.5ul，可先在PCR管中加入裂解液，然后將分選的細(xì)胞直接加入裂解液中），PCR管直立-80凍存，將細(xì)胞和裂解液一起固定在管子底部，固定過后干冰寄送。
4、微量細(xì)胞或單細(xì)胞全基因組甲基化+轉(zhuǎn)錄組測序（scWGBS+Smart-seq2）
注意事項：
1） RNA容易降解且成熟mRNA主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，在細(xì)胞分離前，確保環(huán)境的潔凈，以及分離過程中保證細(xì)胞的完整性，以免細(xì)胞破裂等。
2） 建議超凈臺內(nèi)操作，實驗前用 RNA-zap(Ambion)擦拭實驗臺面及相關(guān)器材，防止RNA 酶污染。
3） RNA 酶在外界環(huán)境，人體皮膚表面、汗液等廣泛存在，試驗操作請佩戴一次性手套及口罩， 并用酒精，RNA-zap擦拭手套和操作空間，實驗過程中不要隨意接觸試驗無關(guān)的易污染物品。
4） 細(xì)胞培養(yǎng)基、體液（如血液）等雜質(zhì)殘留會嚴(yán)重影響后續(xù)酶反應(yīng)，細(xì)胞分離前請先用 PBS 洗滌，去除培養(yǎng)基等雜質(zhì)后再進行后續(xù)操作。
5） 同一項目，不同樣本，保持細(xì)胞的數(shù)量大致相同。
以下情況需提前聯(lián)系，公司寄送RNA細(xì)胞裂解液：
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量大于1000，細(xì)胞收集到PCR管中，細(xì)胞分離殘留液體體積不超過2ul，記錄每個樣品管中的細(xì)胞數(shù)目，在細(xì)胞中加入12ul的RNA細(xì)胞裂解液（如果確定細(xì)胞隨帶的液體體積小于2ul，可先在PCR管中加入裂解液，然后將分選的細(xì)胞直接加入裂解液中），PCR管直立-80凍存，將細(xì)胞和裂解液一起固定在管子底部，固定過后干冰寄送。
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量在500-1000，細(xì)胞收集到PCR管中，細(xì)胞分離殘留液體體積不超過1ul（若樣品為10個細(xì)胞以內(nèi)，盡可能不超過1ul），記錄每個樣品管中的細(xì)胞數(shù)目，在細(xì)胞中加入10ul的RNA細(xì)胞裂解液（如果確定細(xì)胞隨帶的液體體積小于1ul，可先在PCR管中加入裂解液，然后將分選的細(xì)胞直接加入裂解液中），PCR管直立-80凍存，將細(xì)胞和裂解液一起固定在管子底部，固定過后干冰寄送。
若每個樣本細(xì)胞數(shù)量在1-500，細(xì)胞收集到PCR管中，細(xì)胞分離殘留液體體積盡可能不超過0.5ul（若樣品為10個細(xì)胞以內(nèi)，盡可能不超過0.2ul），記錄每個樣品管中的細(xì)胞數(shù)目，在細(xì)胞中加入8ul的RNA細(xì)胞裂解液（如果確定細(xì)胞隨帶的液體體積小于0.5ul，可先在PCR管中加入裂解液，然后將分選的細(xì)胞直接加入裂解液中），PCR管直立-80凍存，將細(xì)胞和裂解液一起固定在管子底部，固定過后干冰寄送。
注意事項
1. 胚胎早期發(fā)育樣本建議去除透明帶。
2. 實驗過程中使用到的吸頭、PCR 管等耗材必須為 Nuclease-Free 級別且是低吸附材質(zhì)。
