血漿cfDNA提取操作流程
血漿cfDNA提取操作流程（版本：2022年9月）
1、血液樣本收集及儲(chǔ)存及注意事項(xiàng)
a) 受試者填寫知情同意書；
b) 受試者無需特殊準(zhǔn)備，無需禁食禁水；
c) 靜脈抽血5-10ml，收集到EDTA抗凝血管中,上下顛倒抗凝采血管，輕輕混勻，全血2-8℃保存不超過4h；如用Streck采血管收集全血，則5-8℃保存不超過72h。全血標(biāo)本不能冷凍保存。
注意：
Streck采血管含有穩(wěn)定劑，保護(hù)細(xì)胞不被裂解，cfDNA不被降解，效果優(yōu)于普通抗凝管；
采血后為防止cfDNA降解和有核細(xì)胞破裂，推薦馬上分離血漿，提取cfDNA，
-20℃保存；如不能馬上提取，常規(guī)采血管采血后必須4h內(nèi)（最好30min-1h內(nèi)）完成血漿分離，-80℃保存；
嚴(yán)重黃疸、溶血和血脂可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2、血漿樣本制備儲(chǔ)存及注意事項(xiàng)
a) 將采血管中的全血在1500g（相對離心力），4℃離心10min，離心起始和結(jié)束盡可能采用緩慢升降速率，防止突然制動(dòng)；
b) 采用移液器將采血管上層血漿轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的無DNase/RNase酶的15ml離心管中，一定不要碰觸或吸到中間細(xì)胞薄層；
c) 將初步收集到的血漿再3000g，4℃進(jìn)一步離心10min，去除殘余細(xì)胞；
d) 將再次離心后的血漿轉(zhuǎn)移到無DNase/RNase酶的1.5/2ml離心管或凍存管中，每管分裝1ml，-80℃保存。血漿樣本不反復(fù)凍融；
e) 制備的血漿應(yīng)不存在溶血、嚴(yán)重黃疸現(xiàn)象。
3、血漿cfDNA的提取
可以選用目前市場上常用的提取試劑盒或磁珠
4、cfDNA樣本運(yùn)輸注意事項(xiàng)
大體積干冰運(yùn)輸，按照寄送路上消耗時(shí)間，每天至少消耗3-4kg干冰。
